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糖类分析方法
来源: | 作者:henobio | 发布时间: 2014-12-25 | 1711 次浏览 | 分享到:
    糖类分析方法
    绝大多数的糖类物质无紫外吸收，所以不能很好地使用UV检测器测定。其检测手段目前常见的主要有以下三种。
1．示差折光检测器RI
    RI是一种通用型检测器，具有广泛的使用范围，它对没有紫外吸收的物质，如高分子化合物、糖类、脂肪烷烃等都能够检测。RI还适用于流动相紫外吸收本底大，不适于紫外吸收检测的体系。在凝胶色谱中RI是必不可少的，尤其是对聚合物分子量分布的测定。利用GPC+RI+标准品，我们可以得到被测物质的相对分子量。

    日本Shodex公司的SHODEX® RI-101检测器是一种新概念示差折光检测器， 它使用微处理器，使得从溶液置换到基线稳定核查能够自动进行，稳定快速。Shodex®RI-101与以往不同的高效液相色谱用示差折光检测器相比，具有以下的特长：

* 优越的操作性：独特的快速平衡功能，在30分钟内自动平衡基线。检测器配备彩色液晶显示器， 易于分析人员一眼就看到操作状态和基线倾向；自动启动功能，使之可自动进行从参比池的溶液置换到基线稳定性核查的复杂操作；用帮助功能，很容易确定和校对装置。

* 出众的稳定性：通过温度调节方式的最优化，电源打开后稳定化时间缩短，并可获得出众的基线稳定性。

* 安全措施：检测器配备泄漏感应器，万一溶剂泄漏，泵可以自动停止。

* 多种自动功能：检测器设有外部输入输出端子以及RS232C通道端口，把检测器与各种液相色谱组合能实现高度自动化。

* 由于快速自动启动功能，达到稳定时间被减半。检测器稳定可在彩色显示器上自动测定核查。

2.粘度检测器

高聚物溶液中的[η]与分子量之间存在着以下定量关系：

3．光散射检测器（LS）
    光散射技术测定高聚物的重均分子量（按分子重量统计平均得到的分子量），是当前应用较为广泛的一种方法。凝胶色谱分离－光散射检测器的结合不但可以直接测量大分子的绝对分子量及分布，还可以得到分子形状、动力学半径、枝化度等信息。

    美国PD公司的PD2000系列的光散射完全与70年代的小角光散射和80年代的多角光散射不同。小角光散射是忽略角度，只进行浓度外推。多角光散射是忽略浓度。PD的光散射利用得拜公式，用角度和浓度同时参与计算。PD2000家族的仪器提供溶液中的聚合物和生物高分子新的精确的数据——绝对分子量、尺寸、形态和其他的特征参数。
它具有以下优点：
①高灵敏度；
②极好的重复性；
③高精度；
④易于操作；
⑤快速从复以前的试验结果；
⑥易于拆卸清洗；
⑦长期稳定工作；
⑧较小的池体积（10微升），与RI联用引起峰加宽效应小；
⑨采用聚焦光路，可以将散射体积见到最小，得到很高的信噪比。
其适用范围涉及：
1)仿生学和医药；
2)塑料和其他的聚合物；
3)蛋白质和多糖类；
4)油漆和涂料；
5)石油化学制品；
6)润滑油；
7)添加物 ；
8)食品生产；
9)环保等，政府，并且其他实验室。

最新分离测试技术

    除了常见的HPLC分离模式之外，现在又新兴起了场流分离色谱（FFF），也可以用来进行多糖的分离。非对称场流分离色谱（AF4）属于FFF家族的一员，是一个新的、有效快速分离和准确描述不同的粒子和大分子的方法。它最早在几年前在文献上有报道，是一个新的与色谱类似的分离技术，分离范围用来从103到1012道尔顿。

    德国POSTNOVA公司HRFFF 10.000系列非对称场流分离色谱是以非对称场流分析原理为基础来工作的，是一项用来分离和表征流体中粒子和大分子的新颖和有效率的分离方法，它是世界上最早的全自动化AF4系统。该系统标准的配置包括不同的泵、检测器、自动进样器等。10.000系列系统能通过样品分子尺寸大小的差异来实现分离并检测分子量、Rg、Rh等。其应用范围包括生物技术、多糖、药物、蛋白质、抗体、环境科学、材料科学等。

HRFFF 10.000优势包括：

* 不使用固定相，分离迅速准确

* 直接进样，没有必要的样品预处理步骤

* 适用于不同的分离条件水相和有机溶剂，分子量和尺寸测定范围大且容易得到

* 快速分离复杂的聚合物、粒子和胶体体系

* 分离中小的作用力能保护样品的生物活性